火影忍者新时代中，千手柱间作为初代火影和忍者之神，其角色互动将围绕历史渊源、血继限界传承、游戏机制联动以及剧情战役展开。根据官方设定及游戏资料，柱间的主要交集角色包括宇智波斑、漩涡鸣人、宇智波佐助以及拥有柱间细胞的关键人物。这些互动不仅还原原著经典对决，还涉及忍术体系继承和团队协作玩法。
宇智波斑是柱间最核心的交互对象，两人从少年时期的羁绊到终结之谷的决战，构成了游戏剧情的主线脉络。在火影忍者：忍者新世代中，玩家可通过木叶创立副本体验两人联手对抗十尾的战役，斑操控完全体须佐能乎与柱间的木人之术形成攻防配合。秽土转生机制让斑与柱间在第四次忍界大战章节中再度对决，斑将吸收柱间的仙术查克拉触发特殊战斗动画。
漩涡鸣人作为阿修罗转世者，与柱间存在查克拉共鸣设定。游戏内当鸣人触发六尾状态时，柱间的木遁秘术可对其产生压制效果，这种机制在尾兽暴走挑战玩法中尤为关键。而宇智波佐助因获得柱间细胞强化，在须佐能乎·威装形态下可与柱间发动组合奥义森罗万象，该技能需消耗双方各2点查克拉能量，属于高难度联合作战内容。
拥有柱间细胞的角色如大和、团藏、带土等，在游戏中会与柱间产生特殊联动。例如大木遁·树界降诞可被柱间强化为真数千手，而带土在十尾人柱力状态下会触发柱间的封印术剧情杀。这些设计均源自阵之书对血继限界的官方设定，玩家在血继实验室玩法中可深度体验细胞移植对战斗力的影响。
在团队副本玩法中，柱间需与二代目千手扉间、三代目猿飞日斩、四代目波风水门组成历代火影阵容，共同施展四赤阳阵对抗十尾。该战斗要求精确把握每位火影的查克拉分配，柱间需优先释放明神门控制敌人行动。新春限定活动中柱间会与纲手组成医疗特攻队，其百豪之术与柱间的仙术恢复可形成持续治疗领域。
根据火影忍者OL的赛季更新公告，未来版本可能开放柱间细胞研究新玩法，届时白绝、药师兜等角色将加入交互体系。当前数据挖掘显示，柱间与六道仙人模式的漩涡鸣人已存在隐藏语音彩蛋，触发条件为在忍界大战地图中同时存活超过180秒。这些内容均严格遵循原作时间线，未添加任何架空剧情。
